產(chǎn)品分類
Meteor光電關聯(lián)CryoFIB集成熒光顯微鏡
產(chǎn)品詳情
Meteor & Meteor 2.0 光電關聯(lián)CryoFIB集成熒光顯微鏡
前言
冷凍電子斷層掃描(cryo-ET)是一種非常強大的技術，可以在接近天然狀態(tài)下以高分辨率研究細胞景像。近年來，該技術越來越受歡迎，越來越多的研究小組正在他們的實驗室中實施它。冷凍電子斷層掃描的強大功能是毋庸置疑的，但該工作流程非常容易出錯，這限制了數(shù)據(jù)產(chǎn)出。在工作流程中，有兩個主要挑戰(zhàn)：保持樣品無冰污染和目標感興趣區(qū)域(ROI)。荷蘭Delmic開發(fā)了兩種名為CERES和METEOR的工作流程解決方案，以簡化整個冷凍電子斷層掃描制備工作流程。CERES Ice Defence System由多種創(chuàng)新工具組成，這些工具專為最大限度地減少樣品處理(Clean Station)、轉移(Vitri-Lock)和CryoFIB研磨冷凍薄片(Ice Shield)過程中的冰晶污染而量身定制。METEOR是一種集成的熒光光學顯微鏡(FLM)，可大大提高冷凍 FIB/SEM制備薄片的良率，同時減少所需的處理步驟數(shù)。實驗表明，結合這些創(chuàng)新工具可以提高冷凍電子斷層掃描數(shù)據(jù)質量和通量。METEOR 2.0是METEOR升級版。
METEOR系統(tǒng)介紹
METEOR是一款獲獎的熒光顯微鏡（FLM），可以直接集成到特定的冷凍聚焦離子束（FIB）/掃描電鏡（SEM）腔室中。METEOR支持原位冷凍光電聯(lián)用（cryo-CLEM），并能輕松適應您的工作流程。它不僅減少了顯微鏡之間的轉移步驟，保護脆弱的樣品免受不必要的污染，還允許您在銑削過程中和之后成像感興趣區(qū)域（ROI）。通過減少當前繁瑣的工作流程中的轉移步驟，METEOR可以大大降低冷凍關聯(lián)顯微技術工作流程的復雜性。您的樣品薄切片制備工作流程將簡化到7個制造步驟：加載樣品，然后捕獲熒光顯微圖像和掃描電鏡圖像，且無需進行樣品轉移，在系統(tǒng)將兩個圖像自動關聯(lián)后，直接移至目標區(qū)域，在完成薄切片研磨之后，用熒光顯微鏡確認感興趣區(qū)域是否完好。
對于冷凍電子斷層掃描（cryo-ET）工作流程，這使得驗證感興趣區(qū)域（ROI）是否包含在樣品中成為可能。不僅來自樣品的熒光標記（FLM）信號確認了目標蛋白質正在通過冷凍電子斷層掃描（cryo-ET）被解析，它還使寶貴的透射電鏡（TEM）機時能更好地用于有用的樣品。在“銑削和觀察”工作流程中，隨著更多材料被銑削，可在原位獲取熒光標記（FLM）數(shù)據(jù)，從而在整個生物材料體積中提高功能和結構數(shù)據(jù)的相關性。
冷凍cryo-ET和體積冷凍CLEM在細胞生物學、病毒學、微生物學、免疫學和藥物開發(fā)領域都能揭示新的見解。通過冷凍電鏡獲得的深刻見解有助于在接近天然的細胞環(huán)境中以亞納米分辨率揭示生物結構。不僅無需蛋白質純化，該技術還允許觀察蛋白質-蛋白質和蛋白質-藥物相互作用。因此，冷凍電鏡有可能提供更有效和針對性的藥物設計流程，并加速藥物開發(fā)進程。借助體積CLEM，可獲取整個細胞的功能和結構信息，提供更全面的視角。細胞器形態(tài)的變化及其分布可輕松追溯到蛋白質表達的水平和位置。
很不幸，通過冷凍cryo-ET和體積cryo-CLEM獲取有用見解的速度受到了其復雜流程的阻礙。當前工作流程包括先用獨立的冷凍熒光顯微鏡cryo-FLM對樣品進行成像，再將其轉移到cryo-FIB設備中，這一過程可能會非常繁瑣和令人沮喪。樣品轉移過程中可能造成的樣品損壞和污染，以及在材料被銑削去除時難以檢查樣品，這些都對成功獲取良好數(shù)據(jù)造成了嚴重影響。這些挑戰(zhàn)以及冷凍cryo-ET和體積冷凍關聯(lián)顯微鏡CLEM的巨大潛力，激勵我們開發(fā)解決方案，以簡化流程并讓研究者充分發(fā)揮潛力。
使用METEOR引導薄片制備時，用戶首先將樣品裝載至配備METEOR的cryo-FIB中。隨后將電鏡載物臺移至METEOR位置，獲取全景圖像和高精度Z軸堆棧，從而定位目標區(qū)域(ROI)。接著移動載物臺至SEM位置采集同一ROI的SEM圖像。通過圖像關聯(lián)分析，用戶可確定薄片制備位置并啟動銑削。在銑削過程中及完成后，均可根據(jù)熒光信號驗證薄片中的ROI存在性，之后再將樣品轉移至冷凍透射電鏡(cryo-TEM)。薄片的熒光顯微鏡(FLM)信號不僅能確認目標蛋白質正被冷凍電子斷層掃描(cryo-ET)解析，還可確保寶貴的透射電鏡(TEM)機時僅用于有用的樣品。
在三維冷凍光電聯(lián)用成像中，樣品首先通過METEOR進行成像以確定目標區(qū)域(ROI)。隨后使用掃描電鏡(SEM)獲取ROI的高對比度圖像，接著用聚焦離子束(FIB)刻蝕樣品表層，之后再次使用SEM對剛暴露的表面進行成像。這種"銑削-觀察"工作流程將在整個樣品體積內重復進行。借助METEOR，隨著更多材料被銑削去除，可以持續(xù)監(jiān)測ROI的熒光信號，從而在整個生物材料體積內實現(xiàn)功能與結構數(shù)據(jù)的關聯(lián)性優(yōu)化。
METEOR系統(tǒng)由3個主要部分組成：電子機架（放置在顯微鏡房間內）、主體（安裝在FIB/SEM聚焦離子束雙束電鏡的一個端口上）和電鏡腔室內光學器件（安裝在FIB/SEM腔室內）。METEOR系統(tǒng)配有一臺控制PC及一套ODEMIS采集軟件，用于系統(tǒng)控制及熒光圖像的采集。
Delmic冷凍解決方案還包括：
CERES Clean Station 清潔的制備工作站: 在定制的高效清潔站中制備低溫EM樣品，以完全防止冰污染；每一步都在無水手套箱（濕度<1%/1ppm水）中輕松制備低溫EM樣品。
CERES Ice Shield 冰盾：在冷凍薄片制備過程中提供終極保護，防止冰污染；采用專有技術，在薄片研磨過程中保護您的低溫樣品免受寄生冰的生長；使冷凍FIB制備更多無冰污染的薄片，以獲得高質量的斷層圖像和高通量。
CERES Vitri-Lock 高真空低溫傳輸模塊：可實現(xiàn)安全無冰污染的低溫樣品轉移；在CERES制備工作站和CryoFIB之間在高真空下傳輸?shù)蜏貥悠?，以盡量減少轉移過程中水分的存在；采用主動冷卻方式，樣品可以保持玻璃化狀態(tài)長達30分鐘。
METEOR 2.0 系統(tǒng)介紹
METEOR 2.0是新一代冷凍熒光顯微鏡系統(tǒng)，專為無縫集成至冷凍聚焦離子束 (cryo-FIB) 而設計。該系統(tǒng)可在高真空腔體內直接進行熒光成像，省去不必要的樣品轉移步驟，從而降低冰污染、樣品失玻璃化以及其他損傷的風險。METEOR 2.0為用戶提供簡化且可靠的工作流程，滿足不斷發(fā)展的冷凍電子斷層掃描 (cryo-ET) 研究需求，確保薄片制備過程高效、精準且無污染。
METEOR 2.0結合大視野成像能力，通過圖像拼接及自動對焦算法，可實現(xiàn)對樣品潛在銑削區(qū)域的快速篩查。高速濾光輪支持快速多通道成像，單次篩查即可獲取樣品中的所有熒光信號的全部分布信息。
METEOR 2.0配備高倍、高數(shù)值孔徑物鏡，確保生物結構的高分辨率精細成像。 系統(tǒng)擁有大視野成像能力，可在保持亞細胞級分辨率的同時觀測完整的生物體。單波段濾光片有效減少光譜串擾，確保標記結構的精準呈現(xiàn)。
METEOR 2.0通過高數(shù)值孔徑(NA)物鏡的高光子收集能力與優(yōu)化光路設計的結合，確保最大量光子到達相機。此外，相機的高量子效率使這些光子能充分參與成像。 因此，即便最終薄片中最微弱的殘留熒光信號，也能通過最小激發(fā)功率被檢測到，從而有效避免薄片損傷或玻璃化狀態(tài)破壞。
METEOR 2.0可在高真空冷凍 FIB/SEM腔室內，實現(xiàn)FIB銑削后薄片的即時熒光驗證。此功能避免了額外轉移導致的污染，確保樣品保持原始狀態(tài)，同時提升冷凍電子斷層掃描 (cryo-ET) 的通量效率。
METEOR 2.0搭載ODEMIS軟件，界面友好、直觀易用且開源，旨在優(yōu)化熒光成像流程，提升操作效率與用戶體驗。ODEMIS軟件特點：一鍵切換FIB、SEM和FM成像模式；調整、保存并重復調用成像參數(shù)；通過冷凍載物臺導航FM模式；通過自動對焦，捕獲并拼接大范圍圖像；針對柵網(wǎng)缺陷調整自動對焦；實現(xiàn) SEM 與FM圖像相關聯(lián)導航；保存ROI的XYZ坐標及聚焦位置；支持以 3D TIFF 文件格式采集 z-stack 圖像；與第三方軟件無縫集成 (MAPS、AutoTEM、ImageJ 等)；免費授權與更新。
使用ODEMIS Viewer可直觀瀏覽和檢查圖像：
o Z軸堆棧最大強度投影
o 直方圖調整
o 元數(shù)據(jù)查看
o 導出帶比例尺的PNG圖像，用于演示或發(fā)表
ODEMIS Advanced是用于精準自動化關聯(lián)冷凍薄片制備的一體化軟件。ODEMIS advanced是一款開源軟件，涵蓋自動化關聯(lián)冷凍薄片制備所需全部功能。集多模態(tài)成像能力與2D/3D關聯(lián)功能，Odemis Advanced作為一站式平臺，簡化相關冷凍薄片制備流程，免去使用多款軟件的繁瑣。 它在標準版ODEMIS功能基礎上擴展，提供以下高級功能：FIB與SEM成像；簡化FIB/SEM重合點的標定；3D FIB與熒光顯微鏡 (FM)關聯(lián)，實現(xiàn)ROI精確定位；自動化多位點薄片銑削，支持高通量制備；在薄片區(qū)域實現(xiàn)自動熒光檢測，減少用戶操作干預。
METEOR 2.0系統(tǒng)定制：METEOR 2.0在物鏡、相機、激發(fā)波長和發(fā)射濾光片組上具有高度可定制性，可根據(jù)具體的科研問題靈活配置系統(tǒng)，實現(xiàn)最優(yōu)成像效果。系統(tǒng)配置可根據(jù)不斷變化的研究需求輕松調整和升級。我們提供向后兼容的更新方案，確保設備始終保持最新狀態(tài)。
附：Meteor視頻簡介(中文字幕)
具有鋼結構工程專業(yè)承包二級資質、建筑工程施工總承包貳級資質；公司主營產(chǎn)品包括重鋼、輕鋼、網(wǎng)架及檁條、彩鋼板等鋼結構產(chǎn)品；近年來，公司承接了國內外大型結構件、橋梁、車庫、標準化廠房等具有較大影響力的一系列項目；產(chǎn)品遠銷白俄羅斯、贊比亞、印尼等國家，得到了一致好評。
關鍵詞： Meteor光電關聯(lián)CryoFIB集成熒光顯微鏡
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